چکیده:آنزیم DNA پلیمر از مقاوم به حرارت به علت کاربرد آن در PCR و بیولوژی مولکولی توجه زیاد شده. هدف سنجش عملکرد تولید آنزیم DNA حساس به سرما و مقاوم به حرارت است. در باکتری و خالص سازی سریع و ارزان آن است. بعد از سنترژن به صورت مصنوعی سپس پلاسمید حاوی ژن تولید کننده آنزیم DNA به سویه E. ColIBl21 انتقال یافت. از IPTG به عنوان القاء گر برای بیان ژن استفاده می شود فعال سازی آنزیم توسط امواج اولتراسوند و به وسیله شوک حرارتی در 720c و رسوب دهی پروتئین های نامحلول و به وسیله سانتریوفوژ انجام می گردد.
DNATaq مقاوم به حرارت و حساس به سرما نوترکیب بیان شده در E. col برتری قابل توجه به عملکرد بهتری نسبت به آنزیم از نظر فعالیت و مقاوم در برابر حرارت است.
ژن تولید کننده آنزیم به محیط کشت LB مایع حاوی آنتی بیوتیک به مدت 3 ساعت در دمای 370c جهت بهینه شدن پروتئین القاء کننده IPTG به محیط است به مدت 12 ساعت انکو به شده پس از القاء خالص سازی اولیه آنزیم توسط اولتراسوند و شکسته شدن دیواره سلول و شوک حرارتی در 720c است. لایه فوقانی توسط سانتریوفوژ جدا شده، از سوپرتانت به عنوان نمونه گیری استفاده می شود. برای تصفیه آنزیم به ستونی که فیلتر شده اضافه می شود. برای تنظیم PH با ضربه آن اضافه می شود. پس از خارج کردن بافر از ستون مدت 2 ساعت انکوبه می شود پروتئین ها جداسازی و خالص سازی روی ژل SDSPAGE الکتروفورز و وزن خالص مشخص می شود.
فهرست مطالب:مقدمه
چکیده و هدف
خالص سازی DNA از سلول های زنده
تهیه کل DNA سلول
دومین محیط کشت
تهیه عصاره سلولی
خالص سازی DNA از عصاره سلولی
تغلیظ نمونه های DNA
تهیه کل DNA سلول
جداسازی براساس اندازه
جداسازی براساس ساختار فضایی
تهیه DNA باکتریوفاژ
کشت باکتری ها برای تهیه مقادیر زیاد فاژ لامبدا
خالص کردن DNA از ذرات فاژ لامبدا
شكستن ديواره’ سلولي و يا ليز كردن سلولها
جدا كردن مواد و DNA
استفاده از نمكهاي رسوب دهنده پروتئن
نتیجه گیری
برچسب ها:
تحقیق خالص سازی DNA استخراج DNA از سلول های زنده تحقیق استخراج DNA از سلول زنده جدا کردن DNA از سلولهای زنده روش خالص سازی DNA گرفته DNA سلولهای زنده تحقیق خالص سازی دی ان ای روش استخراج دی ان ای